医疗废物采用环氧乙烷灭菌消毒处理设备消毒效果检测布点与评价要求

本文内容来自于中国环保部的医疗废物化学消毒集中处理工程技术规范，以下内容为医疗废物化学消毒处理设备采用环氧乙烷灭菌消毒效果检测布点与评价要求，对于EO灭菌以后的行业发展具备指导作用，意义重大。

医疗废物化学消毒处理设备消毒效果检测布点与评价要求

实验器材

（1）实验菌株：枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢。

（2）消毒因子：环氧乙烷。

（3）中和剂：根据不同的化学消毒剂选择适宜的中和剂，中和剂鉴定试验方法见《消毒技术规范》。

（4）洗脱液：含 0.1%吐温 80 的磷酸盐缓冲液（0.03 mol/L，pH 7.2）。

（5）培养基：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）。

（6）载体：①输液管，内径为3 mm，长度为消毒处理设备说明书中规定的最长破碎长度，最长不得大于5 cm，用于干化学消毒。②不锈钢针：直径为0.4 mm，长度为20 mm，用于环氧乙烷消毒。

（7）模拟医疗废物管腔：一次性使用输液器去掉针头部分，直径为3mm、长度约为1.9m。

（8）刻度吸管：刻度为1.0 mL、5.0 mL、10.0 mL。

（9）移液器：刻度为10 μL、20 μL及配套的塑料吸头。

（10）无菌平皿：直径90 mm。

（11）培养箱：37 ℃恒温培养箱。

（12）模拟医疗废物：环氧乙烷灭菌消毒法按厂家说明书的要求，准备干净的各种医疗用品，数量应符合消毒处理设备满载的要求。

染菌载体的制备

1、芽孢悬液的制备：按《消毒技术规范》的方法制备细菌芽孢，用胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）稀释制备好的芽孢，制成芽孢悬液，芽孢含量为 108 CFU/mL～109 CFU/mL。

2、输液管染菌载体的制备：用移液器吸取10 μL芽孢悬液，加入到输液管内，用手轻轻挤压，使其均匀污染于管腔内，将其放入无菌平皿内，置于37 ℃恒温培养箱中干燥，制成染菌载体备用，每个染菌载体的芽孢回收数量为1×106 CFU/载体～5×106 CFU/载体。

3、不锈钢针染菌载体的制备：用两个小铁夹子夹住不锈钢针两端，将其横向支撑起来，用 10 μL 移液器吸取芽孢悬液滴染不锈钢针，每根滴染 5 滴，在室温自然晾干制成染菌载体，每个染菌载体的芽孢回收数量为 1×106 CFU/载体～5×106 CFU/载体。将染菌载体放置于 1.9m 的模拟医疗废物管腔的中间部位，然后盘起该模拟医疗废物管腔（以防止不锈钢针染菌载体移动），放入 180 mm×120 mm 的无菌布袋内备用。

环氧乙烷灭菌消毒试验

（1）将放有含染菌载体的模拟医疗废物管腔的布袋与模拟医疗废物混合放入双层黄色医疗废物垃圾袋中，然后按A.3.2和A.3.3的要求，将该垃圾袋放入消毒处理设备柜室内的存储箱中。在满载的条件下，按厂家使用说明书的消毒处理程序进行消毒处理。

（2）消毒处理完毕后，收集放有染菌载体的布袋。 以无菌操作方式，将不锈钢针染菌载体分别放入含有5 mL洗脱液的试管中，将试管在手掌上振打200次，做10倍系列稀释，选适宜稀释度，分别吸取1 mL，以倾注法接种于两个平皿中，放置于37于恒温培养箱中，培养72小时，计数存活菌数，即为实验组。

（3）分别取2个不锈钢针染菌载体放在室温下，不经消毒处理，待实验组达规定作用时间后，立即将该染菌载体分别移入含5 mL洗脱液的试管中，其余试验步骤与上述实验组相同，作为阳性对照组。

（4）分别吸取1.0 mL洗脱液接种2个无菌平皿，倾入15 mL～20 mL同批次的培养基，并与实验组做同样培养，作为阴性对照组。

以上试验重复3次。

评价要求

经3次重复试验，每次试验的阳性对照组回收菌量均应为1×106 CFU/载体～5×106 CFU/载体，阴性对照组应无菌生长，实验组所有染菌载体的杀灭对数值均≥4.00，可判为消毒合格。